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| 发布日期：2014-06-27 10:18 信息来源:未知 作者：admin 访问次数:
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随着分子生物学和分子遗传学的不断发展，发现许多遗传性疾病和肿瘤都与基因突变有关。常规的检测基因突变方法有限制性长度多态性分析（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）、异源双链分析（Heteroduplex Analysis，HA）、单链构象多态性分析（Single Strand Conformation Polymorphism，SSCP）等。但是这些技术在应用上有些不足并且检测过程繁琐或者需要成本昂贵的仪器设备。等位基因特异PCR与前几种方法相比较更为简便快捷。
等位基因特异PCR的基本原理为TaqDNA聚合酶缺少3’→5’外切酶活性，PCR引物的3’末端错配将导致PCR产物的急剧减少，因此，根据已知突变设计适当的引物就可以通过PCR方法直接区分突变型和野生型基因。等位基因特异PCR需要3条PCR引物，其中上游2条引物是含有待测DNA的突变碱基和正常碱基，另外一条为下游共同引物。上游2条引物的区别仅仅为3’末端碱基不同，根据已知的等位基因突变将引物的3’末端设计在发生突变的位置。在引物设计时，常常引物3’末端的错配不足以达到预期的分辨效果，因此在3’末端的倒数第二位或者第三位碱基人为地引入错配碱基，可以明显提高分辨效果。等位基因特异PCR实验方法按照常规PCR方法进行，但是要对反应体系和反应条件进行优化来控制假阳性和假阴性的出现。
现代生物科学的发展已经确定了某些遗传性疾病与基因组的单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms,SNP）有关，不同个体在疾病易感性、致病因子反应性和其他性状上的差别都与基因组序列的变异有关，这些变异通常是以单核苷酸多态性的形式出现。等位基因特异性PCR的应用就是检测基因组上的SNP。等位基因特异性PCR高通量的筛选方法为临床检测SNP提供了很好的技术支持。
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